Dilutions en série en microbiologie
Vous trouverez ici des questions et réponses sur les dilutions en série et sur les avantages que le Système Dilucup® peut apporter à votre laboratoire.
Dilutions en série en microbiologie
La dilution en série en microbiologie est la dilution progressive d’un échantillon microbien (généralement par un facteur constant comme 1:10) afin de diminuer progressivement la concentration de micro-organismes, de sorte qu’ils puissent être ensemencés sur une boîte et comptés (CFU) dans une plage mesurable et fiable.
Comment le Système Dilucup® peut vous être utile :
Le Système Dilucup® remplace les tubes de dilution traditionnels et les mélangeurs vortex par des cupules de dilution stériles prêtes à l’emploi et un agitateur dédié. Cela simplifie le flux de travail, réduit les erreurs de manipulation et la contamination croisée, et garantit des dilutions décimales cohérentes et standardisées entre les utilisateurs et les laboratoires.
Les dilutions décimales sont des dilutions en série au facteur 10 (1:10), exprimées comme 10⁻¹, 10⁻², 10⁻³, etc., couramment utilisées en microbiologie pour atteindre des concentrations microbiennes gérables.
Comment le Système Dilucup® peut vous être utile :
Le Système Dilucup® est spécifiquement conçu pour les procédés de dilutions décimales.
Chaque Dilucup® contient 9 mL de diluant stérile prêt à l’emploi. Chaque fois que vous ajoutez 1 mL dans une cupule Dilucup®, vous réalisez une dilution décimale 1:10.
Pour effectuer des dilutions en série, il suffit de pipeter 1 mL d’une cupule Dilucup® à la suivante jusqu’à atteindre la concentration souhaitée.
Parfait pour rationaliser les tests microbiologiques de routine.
Les dilutions en série sont utilisées lorsque l’échantillon initial est trop concentré pour donner des résultats significatifs et dénombrables.
En microbiologie, les dilutions en série sont utiles lorsque la culture est si dense qu’un ensemencement direct produirait un tapis bactérien ou trop de colonies pour pouvoir les compter. Les dénombrements doivent se situer dans une plage lisible, typiquement entre 30 et 300 colonies ; l’échantillon doit donc être dilué pour atteindre cette plage.
Comment le Système Dilucup® peut vous être utile :
Le Système Dilucup® vous permet de réaliser facilement et rapidement des dilutions décimales.
Vous pouvez effectuer entre 1 et 12 dilutions par échantillon avec le Dilugent® Shaker ou le Dilushaker III.
- Transférez un volume connu de votre échantillon (par exemple 1 mL) dans un volume connu de diluant (9 mL).
- Mélangez soigneusement.
- Puis transférez 1 mL de cette dilution dans un nouveau récipient contenant du diluant.
- Répétez le processus jusqu’à atteindre le niveau de dilution souhaité.
Comment le Système Dilucup® peut vous être utile :
Réaliser des dilutions en série avec le Système Dilucup® est très simple. Les cupules Dilucup® sont prêtes à l’emploi et contiennent 9 mL de diluant stérile.
Placez simplement les cupules sur l’agitateur, ouvrez-les et commencez à diluer votre échantillon.
L’agitation est activée lorsque vous passez la main devant le capteur ou lorsque vous appuyez sur la pédale.
Le Système Dilucup® est plus rapide, plus reproductible, plus simple à utiliser et beaucoup plus ergonomique que les tubes de dilution et le mélangeur vortex.
En général : pipettes et embouts stériles, tubes de dilution avec diluant stérile, agitateur vortex, boîtes de Petri ou films de Petri et incubateurs.
Si les diluants doivent être préparés au laboratoire, cela nécessite beaucoup plus d’instruments et de matériel, tels que des produits chimiques, des balances, un autoclave, des souches bactériennes pour le contrôle qualité, etc.
Dilucup® remplace les tubes individuels par un plateau de coupelles de dilution prêtes à l’emploi, réduisant ainsi le besoin en matériel, instruments et étapes de préparation, et simplifiant de ce fait la gestion des stocks et la préparation. Avec le Système Dilucup®, vous n’avez besoin que d’un agitateur Dilugent® ou Dilushaker III, de coupelles Dilucup®, de pipettes et d’embouts, de boîtes de Petri et d’un incubateur pour réaliser des dilutions en série et dénombrer les micro-organismes.
Les erreurs typiques incluent des volumes de diluant incorrects, l’oubli ou la mauvaise étiquetage des tubes, un mélange insuffisant des solutions, un volume incorrect prélevé par la pipette, la réutilisation d’embouts de pipette, l’utilisation de diluants contaminés et des erreurs dans le calcul des facteurs de dilution.
Comment le Système Dilucup® peut vous être utile :
Le Système Dilucup® offre de nombreux avantages qui contribuent à minimiser les erreurs lors des dilutions en série.
Les volumes de diluant dans les cupules Dilucup® sont très précis, avec une déviation généralement inférieure à 0,5 % par rapport à 9 mL.
La conception en plaquette, cupule par cupule, et les voyants LED indiquent quelle cupule est en cours de traitement, ce qui réduit au minimum le risque de confusion.
L’agitation de type vortex assurée par le Dilugent® Shaker ou le Dilushaker III garantit un mélange homogène de la dilution.
Les cupules Dilucup® sont stériles et ne doivent être ouvertes qu’immédiatement avant utilisation, ce qui minimise le risque de contamination croisée.
Enfin – et c’est important – les dilutions réalisées avec Dilucup® sont décimales (1:10), ce qui rend les calculs très simples.
Il est très important d’avoir des volumes de diluant très précis, sinon l’erreur de chaque dilution va s’accumuler et conduire à un résultat final incorrect.
Utilisez des pipettes étalonnées, un mélange adéquat, des embouts stériles pour chaque transfert, un étiquetage clair et une technique constante.
Comment le Système Dilucup® peut vous être utile :
Les cupules Dilucup® présentent des volumes de diluant très précis, avec un écart type généralement inférieur à 0,5 % par rapport à 9 mL, ce qui garantit des dénombrements microbiologiques fiables.
Une agitation uniforme et constante ainsi qu’une méthode standardisée améliorent la répétabilité entre les utilisateurs et les laboratoires.
Partiellement oui.
Les dilutions en série avec le Système Dilucup® sont semi-automatisées et standardisées : ses cupules de dilution pré-remplies et son flux de travail ergonomique apportent de nombreux avantages de l’automatisation (rapidité, reproductibilité et réduction des erreurs manuelles).
Calculs
Mélangez 1 part d’échantillon avec 9 parts de diluant (par ex. 1 mL d’échantillon + 9 mL de diluant) pour obtenir une dilution 10⁻¹ (1:10).
Comment le Système Dilucup® peut vous être utile :
Une cupule Dilucup® contient généralement 9 mL de diluant ; en ajoutant 1 mL de l’échantillon à analyser dans une cupule Dilucup®, vous obtenez automatiquement une dilution 1:10.
Simple et sans procédures compliquées.
Réalisez 4 dilutions successives au facteur 1:10 avec Dilucup® (10⁻¹ → 10⁻² → 10⁻³ → 10⁻⁴).
Vous n’avez besoin que de 4 cupules Dilucup® et d’un agitateur. Les dilutions sont faciles à réaliser avec un équipement minimal, et la concentration initiale en micro-organismes est simple à calculer.
UFC/mL = (Nombre de colonies sur la boîte) ÷ (Volume ensemencé en mL × facteur de dilution).
Exemple : 150 colonies à partir de 1 mL d’une dilution au 1/10⁻⁴ → 150 ÷ (1 × 1/10⁻⁴) = 1,5 × 10⁶ UFC/mL.
Calcul des UFC/mL avec le Système Dilucup® :
Le Dilucup® ayant une contenance de 9 mL, il permet des dilutions au 1/10 (décimales). Pour déterminer le nombre de colonies dans l’échantillon initial, il suffit de multiplier par 10 pour chaque dilution, ce qui revient à diviser par 1/10.
Par exemple, si vous avez obtenu 70 UFC/mL dans le Dilucup® numéro 5 (dilution 10-5), vous devez multiplier 70 UFC/mL · 10 · 10 · 10 · 10 · 10 = 7 · 106 UFC/mL de l'échantillon original.
Diluez votre échantillon en série et ensemencez 1 mL à partir des Dilucups que vous jugez contenir une gamme de micro-organismes suffisante pour le dénombrement. Incubez les boîtes pendant la durée requise et comptez les colonies.
Choisissez des boîtes contenant entre 30 et 300 colonies, puis calculez :
Nombre total (UFC/mL ou UFC/g) = colonies ÷ (volume ensemencé × facteur de dilution)
Avantages du Système Dilucup® :
Les dilutions réalisées avec Dilucup® sont toujours au 1/10, ce qui simplifie le calcul de la concentration de micro-organismes dans l’échantillon initial.
Le volume ensemencé étant de 1 mL, il suffit de diviser le nombre d’UFC sur la boîte par le facteur de dilution.
Par exemple, si 1 mL contenu dans la Dilucup® n° 5 contenait 83 UFC, la concentration de micro-organismes dans l'échantillon est :
Si l'échantillon initial était liquide et a été dilué directement avec la Dilucup® :
83 UFC ÷ 10⁻⁵ = 83 UFC × 10⁵ = 8,3 × 10⁶ UFC/mL d'échantillon initial
Si l'échantillon initial était solide et qu'une dilution préalable (10⁻¹) a dû être effectuée dans un sac Stomacher :
83 UFC ÷ 10⁻⁶ = 83 UFC × 10⁶ = 8,3 × 10⁷ UFC/mL d'échantillon initial
Système Dilucup® : votre allié pour des dénombrements faciles et fiables
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